제목

Pretreatment with propidium monoazide/sodium lauroyl sarcosinate improves discrimination of infectious waterborne virus by RT-qPCR combined with magnetic separation

(감염성 휴먼 노로바이러스의 선택적 검출법 확립)

요약

휴먼 노로바이러스(Human Norovirus, Hu-NoV)는 장염을 유발하는 대표적인 수인성?식품매개 바이러스로서 인간의 장 세포에서만 증식하기 때문에 식품 및 환경시료로부터 검출을 위한 세포배양법 및 동물모델 개발에 기술적 한계가 있었다.

최근,  베일러 의대(Baylor College of Medicine)의 연구진들이 인간 장 줄기 세포를 이용한 장세포 기반의 Hu-NoV 배양에 성공하였다고 발표된 바 있으나 세포배양 기술의 상용화 단계에 못 미치는 만큼 Hu-NoV 유전자분석법(RT-qPCR)에 의존할 수밖에 없는 실정이다.

본 연구는 노로바이러스와 고추 마일드 반점 바이러스를 대상으로 기존의 유전자분석법에서 발생할 수 있는 거짓양성 반응을 최소화시키는 연구를 수행하였다. 시료 분석 시 거짓양성의 주요 원인인 비활성 바이러스의 RNA를 propidium monoazide(PMA)의 광활성 반응 처리를 이용해 바이러스로부터 유래한 ssRNA와 PMA의 반응성이 확인되었고, 비활성 바이러스 유전자의 증폭을 억제시켰다.

이때 바이러스 외피단백질 표면에 sodium lauroyl sarcosinate(sarkosyl)을 전처리함으로써 PMA의 효율적인 침투를 극대화 시켰다. 분석 시료로부터 효율적인 Hu-NoV와 PMMoV 농축을 위하여 양이온성 고분자화합물(poly-methyl vinyl ether-maleic anhydride)이 코팅된 나노자석 비드를 사용하였으며, 농축된 바이러스 입자에 최적 조건의 sarkosyl 전처리 단계가 PMA/RT-qPCR의 분석 신뢰도를 향상시킨다는 것을 확인했다.